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ELISA实验过程中常见问题及解答!
上海原鑫生物科技有限公司2024-11-13 10:33:36

1、ELISA试验出现非常弱的结果,常见有7种原因,其解决方法如下:

1)可能原因:温育的时间或者温度不够;

解决方法:校正温育箱温度。

2)可能原因:显色反应时间太短;

解决方法:校正定时钟准确定时。

3)可能原因:所用配制缓冲液的蒸馏水有问题;

解决方法:使用新鲜合格的蒸馏水。

4)可能原因:加入抗体/酶的稀释液浓度太低;

解决方法:按照说明书保存试剂盒和准确配制工作液。校正移液器,吸嘴要配套,装吸嘴时要紧密。

5)可能原因:酶标仪滤光片不正确;

解决方法:检查酶标仪使用的滤光片。

6)可能原因:试剂盒没有充分平衡;

解决方法:试剂室温平衡至少20分钟,确保所有试剂已平衡至室温。

7)可能原因:不正确的试剂储存方式;

解决方法:按照说明书要求保存试剂盒。

2、 试验结果白板,而且阳性对照不显色,应如何分析和查找原因?

答:试验结果白板,而且阳性对照不显色,常见原因如下:

a)可能原因:漏加或者误加试剂;

解决方法:检查试验记录和剩余试剂。每次加液前均应核对标签。

b)可能原因:试剂过期;

解决方法:使用有效期内的产品。

c)可能原因:洗板液配制中出现问题,如量筒不干净含HRP酶抑制物(叠氮钠)

解决方法:使用干净的器皿,正确配制试剂。

d)可能原因:温育的时间或温度不够;

解决方法:校正温育箱温度。

e)可能原因:标准品失活或者丢失;

解决方法:标准品正确保存、溶解和混匀。

f)可能原因:抗体失活或者丢失;

解决方法:更换抗体或者提高抗体浓度

g)可能原因:酶失活或者丢失

检查方法:把工作浓度的酶再稀释20-100倍,取5uL加入50ul的显色底物,终止后显色是否能达到1.0左右,此为酶的粗略估计。

解决方法:更换酶或者提高酶的浓度。

h)可能原因:显色底物失活

检查方法:加少量的工作浓度的酶,TMB是否很快显色。

解决办法:更换显色底物.

3. 试验结果空白背景高,这是什么原因造成的?

答:试验结果空白背景高,常见原因如下:

a)可能原因:洗板不干净;

解决方法:充分洗涤,彻底拍干,不要反复使用,否则易造成污染。

b)可能原因:显色液变质或者试剂过期;

解决方法:检查试剂盒有效期。

c)可能原因:试剂稀释有误

解决方法:请按说明书所示稀释倍数配制;

d)可能原因:蒸馏水受酶等污染

解决方法:使用新鲜蒸馏水;

e)可能原因:试剂混用;

解决方法:不同批号试剂勿混用。

f)可能原因:培养箱温度超过37℃或反应时间过长。

解决方法:显色反应时间适当缩短。

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